BUNSEN本生：血清使用時(shí)的一些注意事項(xiàng)

　　使用血清的時(shí)候，需注意的操作 :

　　1、凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)按照所主張的逐步凍結(jié)法(-20℃至4℃至室溫)，若血清凍結(jié)時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，試驗(yàn)顯示十分簡(jiǎn)單發(fā)生沉淀物。

　　2、凍結(jié)血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉淀的發(fā)生。

　　3、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，以致血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此遭到損害，而影響血清的質(zhì)量。

　　4、血清的熱滅活十分簡(jiǎn)單形成沉淀物的增多，若非必要，能夠無(wú)須做此步驟。

　　5、若有必要做血清的熱滅活，請(qǐng)恪守56℃，30 分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)形成沉淀物的增多。

　　一、儲(chǔ)存條件

　　血清一般儲(chǔ)存于-20 ℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。若存放于 4 ℃ 時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。

　　二、血清中絮狀沉淀的處理

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白，這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。

　　離心血清(400 g，1-2 分鐘)或簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里。

　　大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至 37 ℃就會(huì)再溶解。

　　一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾。

　　三、使用濃度

　　一般為 5-20 % ，是 10 %。過(guò)多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無(wú)限細(xì)胞系，迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。

　　四、解凍方法

　　血清從冰箱取出后應(yīng)慢慢地解凍。最好在 4 ℃ 低溫冰箱里放置一天或直到融化為止。如果時(shí)間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法：

　　1. 將血清從冰箱里取出后，在室溫下放置 15-20 分鐘。

　　2. 然后將血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。過(guò)高溫度會(huì)導(dǎo)致血清出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。不要讓水淹沒(méi)裝有血清的瓶子。

　　3. 每隔 5 分鐘左右適當(dāng)搖晃瓶子，直到地解凍為止。

　　五、熱滅活方法

　　加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng) ES 細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56 ℃，30 分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

　　1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。

　　2. 在血清解凍時(shí)，將一個(gè)容器裝入適量的水，用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過(guò)程中檢測(cè)瓶?jī)?nèi)水的溫度。容器大小、質(zhì)地和裝水的量最好與裝血清的瓶子相同或相似。

　　3. 待血清解凍時(shí)，將含有血清的瓶子放在預(yù)熱的 56 ℃水浴里，不要將含有血清的瓶子讓水淹沒(méi)或接近瓶子的蓋子，以免導(dǎo)致污染。

　　4. 在開(kāi)始加熱處理時(shí)，要及時(shí)使用溫度計(jì)測(cè)定模擬瓶?jī)?nèi)水的溫度。

　　5. 在預(yù)熱期間，每隔 3-5 分鐘要適當(dāng)搖晃含有血清和水的瓶子，確保瓶?jī)?nèi)液體均勻加熱。

　　6. 一旦模擬瓶?jī)?nèi)的水溫達(dá)到 55.8± 0.5 ℃時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，并在此溫度范圍內(nèi)熱處理 30 分鐘，然后立即放在冰上冷卻。

　　為防止在熱處理過(guò)程中由蛋白質(zhì)變性而導(dǎo)致的渾濁和沉淀現(xiàn)象，熱處理時(shí)應(yīng)注意下列事項(xiàng)：

　　1. 不要用高于 25 ℃ 以上的溫度加快解凍速度。

　　2. 在熱處理之前，要使血清融解。

　　3. 不要使熱處理的溫度高于 56.3 ℃

　　4. 熱處理時(shí)間不要長(zhǎng)于 30 分鐘。

　　5. 在加熱過(guò)程中一定要定時(shí)搖動(dòng)血清。

　　六、避免事項(xiàng)

　　1.避免反復(fù)凍融

　　長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在 2-8 ℃ 時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。

　　2.避免產(chǎn)生沉淀

　　解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

　　血清分裝時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

　　勿將血清置于 37 ℃ 太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

　　七、建議事項(xiàng)

　　一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。

　　血清 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。